市面上常见的玻璃底培养皿，通常是在塑料培养皿底部打个洞，再将厚度为170-220μm的盖玻片或细胞爬片用无影胶水或硅胶粘于培养皿设备底部。并不是整个培养皿的底部都是玻璃材质的。适用于观测的区域仅仅在打孔的区域。但是由于玻璃的疏水性，往往在培养细胞的时候，细胞不能在玻璃上很好地贴壁，生长状态并不好，甚至在做共聚焦扫描成像的时候发生细胞脱片的现象。

      想要细胞好好贴壁，所使用的玻璃底培养皿进行细胞培养之前，要确认已经包被了特定的蛋白试剂。

      培养不同的细胞，需要的包被试剂也不同。同时，因为用于包被的蛋白是生物产物，所以不同公司的包被蛋白的产品纯度和用量都是不同的，本技术帖只是提供参考，具体的包被试剂用量还是要参考所用品牌的说明书。并且最好以自己所用的试剂先做一个梯度实验，找出最适合的包被浓度。

      PLL包被适用于绝大多数细胞，尤其适用于中枢系统神经元的培养。在使用时需要使单位面积上的蛋白含量（μg/cm2）达到理想的量。本例中PLL推荐包被的用量为 2μg/cm2。需要根据包被面积，包被体积，来计算所需要蛋白质的量。

      比如：35mm玻璃底培养皿，细胞生长面积是3.5cm2，包被面积是4.1cm2，包被液体积是400μl，那根据推荐用量2μg/cm2。那么单孔中需要8.2μg的PLL，如果只加入400μl的PLL溶液，那PLL的溶液浓度为20.5μg/ml（约为 20μg/ml）。所以，需要用超纯水将原液进行稀释。

      具体步骤：

      1.使用超纯水按照1:5稀释PLL原液。

      2.在每个35mm玻璃底培养皿中加入400μl的PLL稀释液。

      3.室温孵育1-2小时，吸出PLL稀释液。

      4.使用2ml PBS溶液或无血清培养基小心的清洗3次，吸尽清洗液。

      5.直接加入细胞悬液进行培养。

      方法评价：由于各种包被蛋白的性质不同，不同的包被蛋白使用方法也不一样。经常由于需要对玻璃底培养皿包被，而产生了新的污染。而且污染往往是开始养细胞了以后才会发现，这样不仅耽误了时间，而且也浪费了试剂盒耗材。毕竟包被蛋白试剂和质量有保证的玻璃底培养皿价格也是不菲的（质量不过关的玻璃底培养皿有可能会因为胶水没有粘匀而漏液或者使用的胶水对细胞有毒性）。